ELISA實驗樣本處理基本步驟

　　一、樣本類型與預處理

　　血清樣本?

　　采集后室溫靜置10-20分鐘自然凝固，2000-3000轉/分離心20分鐘，收集上清液。若保存后出現沉淀，需再次離心?。

　　避免溶血或脂血樣本，高脂血需稀釋或超濾處理?。

　　血漿樣本?

　　使用EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉抗凝，混合10-20分鐘后離心(2000-3000轉/分，20分鐘)，取上清?。

　　尿液/胸腹水/腦脊液?

　　無菌管收集，離心后取上清，沉淀需復離心?。

　　細胞培養上清?

　　直接離心(2000-3000轉/分，20分鐘)收集上清;檢測細胞內成分需裂解細胞(如凍融法)后離心?。

　　組織樣本?

　　稱重后加入PBS勻漿，離心取上清，分裝后-20℃保存?。

　　二、關鍵注意事項

　　保存條件?

　　短期(1周內)檢測可2-8℃保存;長期需分裝后-20℃或-80℃凍存，避免反復凍融?。

　　稀釋與干擾?

　　高濃度樣本需預實驗確定稀釋倍數，避免超出檢測范圍?。

　　避免使用含裂解試劑的樣本(如RIPA)，可能干擾抗原-抗體結合?。

　　特殊樣本處理?

　　唾液/糞便?：需高速離心(4000×g)去除雜質?。

　　全血?：抗凝后立即混勻，防止凝固?。

　　三、操作流程示例

　　樣本離心?：2000-3000轉/分，20分鐘，4℃或室溫(依試劑盒要求)?。

　　上清分裝?：按單次用量分裝，避免反復凍融?。

　　檢測前復檢?：離心去除沉淀，確保樣本澄清?。

　　四、常見問題與解決

　　沉淀處理?：離心后仍渾濁可過濾(0.22 μm濾膜)或超濾濃縮?。

　　高背景值?：檢查樣本是否溶血或含高濃度脂質，必要時稀釋?。

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