ELISA試劑盒檢測(cè)不成功的原因及解決方案

　　1. ‌低信號(hào)強(qiáng)度(靈敏度不足)‌

　　可能原因‌：

　　抗原/抗體濃度不足或孵育時(shí)間過(guò)短‌。

　　酶標(biāo)記物(如HRP)失活或底物(如TMB)避光不當(dāng)‌。

　　解決方案‌：

　　延長(zhǎng)抗體孵育時(shí)間(如4℃過(guò)夜)或增加酶標(biāo)記物濃度‌。

　　顯色反應(yīng)嚴(yán)格避光，避免底物降解‌。

　　2. ‌高背景信號(hào)‌

　　可能原因‌：

　　封閉不充分(如BSA或脫脂牛奶封閉時(shí)間不足)‌。

　　洗滌不凈(殘留未結(jié)合的酶或底物)‌。

　　解決方案‌：

　　延長(zhǎng)封閉時(shí)間(≥30分鐘)并確保洗滌液充分浸泡孔內(nèi)‌。

　　控制溫育溫度(37℃±0.5℃)，避免蒸發(fā)導(dǎo)致濃度異常‌。

　　3. ‌重復(fù)性差(復(fù)孔差異大)‌

　　可能原因‌：

　　加樣量不一致或移液器未校準(zhǔn)‌。

　　孵育時(shí)間/溫度波動(dòng)(如頻繁開蓋)‌。

　　解決方案‌：

　　使用校準(zhǔn)后的移液器，同步加樣時(shí)間‌。

　　使用恒溫箱并減少開蓋次數(shù)‌。

　　4. ‌樣本問(wèn)題‌

　　可能原因‌：

　　樣本溶血、反復(fù)凍融或細(xì)菌污染‌。

　　保存條件不當(dāng)(如未分裝導(dǎo)致反復(fù)凍融)‌。

　　解決方案‌：

　　離心后取上清，避免溶血干擾;分裝保存于-80℃‌。

　　短期檢測(cè)樣本可4℃保存，長(zhǎng)期需凍存‌。

　　5. ‌操作流程問(wèn)題‌

　　可能原因‌：

　　顯色時(shí)間不足或過(guò)長(zhǎng)(超出說(shuō)明書范圍)‌。

　　試劑污染或過(guò)期(如酶標(biāo)板未密封)‌。

　　解決方案‌：

　　嚴(yán)格按說(shuō)明書控制顯色時(shí)間(通常10-15分鐘)‌。

　　使用新鮮試劑，避免交叉污染(如更換吸頭)‌。

　　6. ‌其他干擾因素‌

　　溫度波動(dòng)‌：水浴或恒溫箱需預(yù)熱至平衡溫度，避免疊放微孔板‌。

　　時(shí)間差異‌：大批量樣本建議分批操作，減少操作時(shí)差‌。

　　通過(guò)優(yōu)化上述環(huán)節(jié)，可顯著提高ELISA檢測(cè)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性‌。

　　注：以上資料供參考，不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù)，如需具體產(chǎn)品說(shuō)明請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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